본 연구는 disarmed Ti-plasmid 벡터를 이용하여 양버들의 형질전환과 재분화를 시키는 데에 목적을 두었다. 양버들 화경조직을 SS-CAT/NOSNPTII gene를 가진 non-oncogenic Ti-plasmid 벡터로 형질전환시켜 kanamycin에 저항성을 가진 칼루스를 얻어 식물체를 재분화시켰다.
주요 실험결과는 다음과 같다.
1. 잎과 화경조직을 Agrobacterium suspension (660nm에서 흡광도 1.0)에 30분동안 cocultuvation 한 후 suspension medium에 설치된 fillter paperbridge 상에서 48시간 동안 preconditioning 시킨 후 MS+IAA 0.5mg/l+BA 0.1mg/l+kanamycin 75mg/l에 치상하였을 때 95% 이상의 칼루스형성을 보였다.
2. 형실전환된 칼루스는 0.1mg/l NAA, 0.5mg/l BA, 100mg/l kanamycin이 첨가된 White 기본배지로 계대배양후 shoots가 형성되었고 20mg/l kanamycin, 0.2mg/l IBA를 포함하는 GD배지에서 발근되었다.
3. disarmed strain으로 유기된 식물체를 pTiC58로 형질전환시켜 100mg/l kanamycin에서 tumor를 형성하였다. double transformant와 tumor, teratoma shoot, teratoma root에서 high voltage electrophoresis를 수행하여 opine synthesis gene의 발현을 확인할 수 있었다.
4. 호르몬 비첨가배지에서 virulent Vector System에 의해 5mm tumor가 생긴 후 6μM 2,3,5-triiodobenzoic acid, 10^(-3)M acetyl salicylate가 포함된 White 기본배지로 계대배양시 90%의 shoot 형성을 보여 hormone control에 의해서 tumor로부터 식물체를 유기할 수 있었다.