APH(3`)의 촉매작용에 의한 kanamycin B(KMB)의 kanamycin B-3`-phosphate(3`-PKMB)로의 변환 반응을 산업적으로 이용하기 위하여 E. coli KFCC10690이 생산하는 APH(3`)의 특성 구명을 목적으로 본 연구를 실시하였다. E. coli KFCC10690 균주를 배양하여 얻은 배양액으로부터 APH(3`)을 정제하였으며, 온도, pH, kinetic parameters, APH(3`) 반응의 effectors, inhibitors에 대한 특성을 확인하였다. 그 결과, E. coli KFCC10690이 생산하는 APH(3`)의 분자량은 SDS-polyacrylamide gel상에서 60,000 정도이었으며, 반응 최적 온도는 35∼40℃ 반응 최적 pH는 7.0, KMB에 대한 Km은 5.9×10^(-4)M, ATP에 대한 Km은 1.2×10^(-3)M인 것으로 측정되었다.