배경: 지방 염색을 통해 뼈의 골절이나 수술을 할 때에, 유리된 지방으로 인하여 혈관 등이 폐쇄되어 막히는 지방색전증, 비정상적인 장소에 존재하는 지방, 세포막이나 수초가 악화된 상태로 존재하는 지방방울, 그리고 다른 type의 tumor와의 구별 등 조직 내 지질을 확인하여 병리학적 진단을 결정할 수 있다. 신선한 조직에서만 지질을 증명할 수 있는 것이 아니라 고정된 조직도 보관방법에 따라 장기간 조직 내 지질의 보존이 가능한 것을 증명하기 위해 본 실험을 하였다. 14주의 OLETF rat(Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty, Japan, 당뇨유발 비만 쥐)의 신선한 지방간 유발 간 조직을 4% paraformaldehyde에 고정 후, 30% sucrose media를 이용하여 4℃냉장보관 상태에서 적출한 간 조직의 지방을 소실되지 않고 잘 보존되는 것을 알아보고자 지방염색(Oil Red O)을 시행하였다. 방법: 14주의 OLETF rat(당뇨유발 비만 쥐)의 신선한 지방간 유발 간 조직의 일부는 적출 후 고정하지 않고 즉시 동결절편하여 지질염색(Oil red O)을 하였고, 나머지 간 조직은 4% paraformaldehyde용액에 3일간 4℃에서 고정 후 30% sucrose용액으로 옮겨 담아 4℃에서 4주, 8주 후에도 간 조직의 지방이 보존되는 것을 확인하기 위해 동결절편 후 지방염색(Oil Red O)을 하였다. 4% paraformaldehyde에 고정을 하였기 때문에 전 고정 혹은 지방완화 단계를 거치지 않았다. 1. 탈수 : 100% prophylene glycol - 5분. 2. 지방염색 : Oil red O 용액 - 60℃, 7분. 3. 함수 : 85% prophylene glycol - 3분. 4. 배경염색 : Harri``s hematoxylin - 2분. 5. 수세 : 증류수 - 3회, 각 2분. 6. 봉입 : Glycerin Gelly. 결과: 1. 고정하지 않고 즉시 지질염색을 시행한 조직 : 양성. 2. 4% paraformaldehyde고정 후 30% sucrose media에서 4℃, 4주 보관 조직 : 양성. 3. 4% paraformaldehyde고정 후 30% sucrose media에서 4℃, 8주 보관 조직 : 양성 고정을 하지 않고 즉시 지질염색을 시행한 조직이나, 4% paraformaldehyde고정 후 30% sucrose media에서 4℃에서 4주, 그리고 8주 보관 조직 모두 지질염색에서 동일하게 양성반응이 나왔다. 고찰: formaldehyde계열의 고정제는 인지질에 근접한 단백질을 고정함으로써 인지질의 안정화 에 기여한다. 보통 지질을 증명하기 위해서는 10% NBF, calcium formol이나 4% paraformaldehyde와 같이 formaldehyde계열의 고정제를 사용하며, 이들을 제외한 대부분의 고정제, 혹은 지질을 용해시키는 알코올 등, 유기용매가 포함된 용액을 사용해서는 안 되며, 신선한 조직을 동결절편하고 일반적으로 사용되는 수용성 포매제를 이용하여 지방을 증명한다. 하지만 본 실험에서는 지질을 증명하기 위한 방법으로 신선조직 뿐만 아니라 고정된 조직도 보관방법에 따라 장기간 지질을 보존 할 수 있음을 확인하였고, 조직을 고정 후 30% sucrose media를 이용하면, 즉시 동결절편을 할 수 없는 상황이거나, 운송 시 지질을 보존하는 좋은 방법으로 사료된다.