목적 : LIF가 착상전 초기 생쥐배아의 발달에 미치는 영향을 이해하기 위하여 재조합 인간 LIF 에 대한 항체 및 재조합 인간 LIF를 이용하여 본 연구를 수행하였다. 연구방법 : 과배란 유도 후 얻은 ICR 계통의 생쥐 1-세포기 배아를 인간 난관상피세포와 96시간 동안 CO2 배양기 (37 ℃, 5% CO2)에서 공배양하고, 대조군으로 1-세포기 배아를 0.4% BSA 를 함유한 HTF 배양액에서 배양하였다. 다음으로 인간 난관상피세포와의 공배양군에 anti-LIF antibody를 각각 1 pg, 10 pg, 100 pg, 1 ng씩 농도를 달리하여 첨가하여 anti-LIF antibody가 첨가되지 않은 인간 난관상피세포와의 공배양군에서의 배양결과와 비교하였다. 또한 0.4% BSA 를 함유한 HTF 배양액에 rhLIF 를 각각 2000 U, 1000 U, 100 U, 10 U씩 농도를 달리하여 첨가하여 LIF 가 첨가되지 않은 단순 배양액에서의 배양결과와 비교관찰하였다. 결과 : 1. 배양액(0.4% BSA가 첨가된 HTF)단독으로 배양한 경우보다 인간난관 상피세포를 이용한 공배양의 경우 배아의 난할정도가 의미있게 높았다(p<0.05). 2. 재조합 인간 LIF 에 대한 항체를 난관상피세포와의 공배양에 첨가한 경우 첨가한 항체의 농도가 높을수록 4-세포기 이후로의 난할율이 낮아지는 것을 볼 수 있었으며(p<0.05), 첨가한 항체의 농도가 1 ng이상인 경우에는 2-세포기 이후로는 난할이 관찰되지 않았다. 3. 2-세포기 정지가 일어난 ICR 계통의 생쥐배아 배양시 재조합 인간 LIF 를 첨가한 경우와 배양액 단독으로 배양한 결과를 비교하여 보았을 때 양군 모두 4-세포기까지는 난할이 일어나는 것을 볼 수 있었으나, 그 이상의 분화는 일어나지 않았고, 재조합 인간 LIF를 첨가한 군에서 분화정도가 의미있게 높았다(p<0.05). 결론 : 이상의 결과로 볼 때 공배양 동안 인간난관 상피세포에서 분비되는 LIF 는 착상전 초기배아의 발달에 중요한 영향을 미치는 인자로 작용하나, 체외배양시에 재조합 인간 LIF 의 첨가만으로는 정상적인 배발생이 진행되지 않는 것으로 보아 공배양의 효과는 LIF 와 다른 인자와의 상호작용에 의해 나타나는 것으로 사료된다. 또한 재조합 인간 LIF 를 첨가한 배양액에서 2-세포기 억제가 극복되었다는 사실은 LIF 가 2-세포기 억제현상과 밀접한 관계가 있음을 시사하는 소견이라 생각된다.

Objective : To assess the effect of recombinant human leukemia inhibitory factor on in vitro development of 1-cell ICR mouse embryo.Materials and Method : ICR mice were superovulated with PMSG/hCG and 1-cell stage mouse embryos were recruited. 1-cell mouse embryo were cocultured on human oviductal cells in a CO2 incubator (coculture group) and were cultured on 0.4% BSA+HTF media (control group). And anti-hLIF Ab was added to the cocultured group in a different concentration (1pg, 10pg, 100pg, 1ng) and developmental rate was compaired to the control group, and rhLIF was added to the preincubated 0.4% BSA+HTF media in a different concentration (2000U, 1000U, 100U, 10U) and its developmental rate was compaired to group which was cultured on 0.4% BSA+HTF media only.Result :1. The cleavage rate of 2-cell mouse embryo co-cultured with human tubal epithelial cell was significantly higher than that of cultured with media alone (HTF with 0.4% BSA) (p<0.05). 2. When LIF antibody was added to the medium with human tubal epitherlial cell, the mouse embryo could not cleave more than 2-cell in 1 ng of LIF antibody, and less than 1 ng, the cleavage rate was lower than cultured without LIF antibody group(p<0.05).3. Two cell blocked ICR mouse embryos were developed into four cells under LIF(p<0.05), but no further development was observed. Conclusion : These results shows that LIF enhances the development of preimplantation embryo, and when rhLIF is applicated in vitro, it has positive effects on the development of early mouse embryo and can help overcoming the two-cell block.