목적: 산모 혈액 채취를 통하여 말초혈액내에서 태아세포만을 정확히 분리해낸다면 비침습적으로 태아 염색체 이상 등을 진단할 수 있어 보다 바람직한 산전진단법이 될 수 있을 것이다. 모체혈액내에서 태아세포 분리의 문제점인 모체세포의 오염, 그리고 극소량의 태아세포를 분리하는데 따르는 어려움을 해결하기 위하여, glycophorin A[GPA] 염색과 미세절제술[microdissection]을 모체혈액내 태아세포 분리에 이용하여 태아세포를 단일세포주로 분리하는 그 가능성을 확인하고자 본 연구를 실시하였다. 방법: 임신 15주 - 18주의 산모 13명을 대상으로 하여 양수천자 직전 정맥혈 20ml을 채취하여triple density gradient하에서 원심분리하고 CD45 단일클론항체를 처리한 후 MACS를 이용하여 불필요한 모체세포를 제거하였다. 이를 다시 유핵적혈구의 특이항체인 GPA로 염색하여 확인된 태아 유핵적혈구를 미세조작기를 이용하여 미세절제하였다. 이 후 DNA를 추출한 후, 태아 Y-특이 띠에 대한 소식자를 사용하여 nested PCR를 시행하였다. 그 후 최종적으로 양수검사를 통한 세포유전학 검사에 의해 확인된 태아의 성별과 비교하였다. 결과: GPA 염색과 미세절제술 후 추출한 DNA를 이용한 nested PCR을 시행한 경우, 198 bp에서 Y 염색체에 해당하는 띠를 보인 경우는 남아로 진단 하였고, 그렇지 않은 경우는 여아로 진단하였다. 그 결과 총 13예중 4예에서 Y-특이 띠가 관찰되었고, 9예에서는 띠가 관찰되지 않았다. 양수천자 후 확인된 결과에서 띠가 관찰된 4예는 모두 남아로 판정이 되었으나, 띠가 나타나지 않은 9예 중 8예에서는 여아로 판정되었지만, 1예에서는 남아로 판정이 되어 민감도 80%[4/5], 특이도 100%[8/8], 양성예측율 100%[4/4], 음성예측율 88.9%[8/9]의 결과를 얻었다. 결론: 대상군이 적어서 결과분석에는 어려움이 있으나 GPA 염색과 미세절제술을 이용하여 태아 유핵적혈구를 단일세포 수준으로 선택적으로 분리하였고, 이를 nested PCR을 이용하여 태아성별을 산전진단하였다. GPA 염색과 미세절제술을 통한 태아세포 분리는 모체세포의 오염을 줄이고 태아 유핵적혈구를 선택적으로 분리하여 산전진단에 이용할 수 있어, 효과적인 비침습적 태아세포분리 방법이 되리라 사료된다.

Objective: Fetal cells in maternal circulation offer a potential source of fetal informations by noninvasive procedure. As there is no completely selective method to separate fetal cells from maternal blood so far, we investigated the effectiveness of isolating nucleated red blood cell[nRBC] from maternal blood by glycophorin A[GPA] staining and microdissection. Methods: Peripheral blood samples were obtained from 13 pregnant women at 15th to 18th week of gestations. Samples were centrifuged under triple density gradient and handled by magnetic activated cell sorter[MACS] using CD45 monoclonal antibody for removing maternal cells. GPA stain and hematoxylene-eosin counter stain were perfomed to decrease maternal cell contamination. The microdissection of GPA-stained nRBC and nested PCR using Y chromosome-specific primer were underwent for determination of fetal sex. The results were compared with those of amniocentesis for the assessment of efficacy. Results: Four cases had Y-specific sequence on 198 base pair by nested PCR. And other 9 cases did not show Y-specific band. All of Y-band positive cases and additional one of Y-band negative cases were identified to be male fetus by amniocentesis. This study shows 80%[4/5] of sensitivity, 100%[8/8] of specificity, 100% [4/4] of positive and 88.9%[8/9] of negative predictivity. Conclusion: These results suggest that GPA staining followed by microdissection could diminish maternal cell contamination and isolate fetal cells effectively.