Bacillus spp.의 Cephalexin acylase 유전자가 클로닝된 Escherichia coli SH2 군주에 NTG를 처리하여 효소의 활성이 증가된 돌연변이주의 분리를 시도하였다. 변이주의 선별에는 cephalexin에 덜 민감한 E. coli K12를 이용하여 Bioassay를 수행하였다. 이 시험조건에서 야생형은 clear zone을 형성하지 않는 반면 cephalexin 합성능이 향상된 돌연변이주는 형성함이 관찰되었다. 이와 같은 방법으로 E. coli SH2 B, E. coli SH2D, E. coli SH2BI 그리고 E. coli SH2B7 등의 돌연변이주들이 분리되었다. 각 돌연변이주의 효소활성증가를 정량적으로 분석하기 위하여 Penicillin G 기수분해 역가를 측정해 된 결과, 각각 2배에서 10배 정도 범위내에서 효소활성의 증가가 관찰되었다. 이들 돌연변이의 변이위치를 결정하기 위해 제한효소 EcoR I 과 EcoN I으로 mapping한 결과, E. coli SH2B, E. coli SH2B I 그리고 E. coli SH2B7 모두 cephalexin acylase의 C-terminal 부위에서 돌연변이가 일어났음을 알 수 있었다.