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임상미생물검사학회 초록집 update

The Korean Society for Clinical Laboratory Microbiology

  • : 대한임상병리사협회
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수록정보
2009권1호(2009) |수록논문 수 : 35
간행물 제목
2009권1호(2009년) 수록논문
권호별 수록 논문
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1그람염색의 ABC

저자 : 주세익

발행기관 : 대한임상병리사협회 간행물 : 임상미생물검사학회 초록집 2009권 1호 발행 연도 : 2009 페이지 : pp. 24-24 (1 pages)

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서 론 그람염색은 임상미생물검사의 가장 기초적인 검사법 중 하나이다. 그람염색은 1884년 HC Gram에 의해 처음 제시되고, 1921년 Hucker에 의해 Safranin 대조염색이 추가된 이후 오늘까지 그 기본적인 방법에서 변함이 없이 사용되고 있다. 세균의 세포벽의 구조, 성분적 차이에 의한 세균감별의 가장 원초적인 검사법인 그람염색을 현장에서 완벽하게 이용하고 있는지 그 원리로부터 역사, 임상적 의의, 진단에의 응용 등을 재조명하고자 한다. 본 론 그람염색의 원리는 그람양성세균과 음성세균의 세포벽의 구조가 차이를 보임으로써 염색과정에서 생성된 crystal violet-iodine 복합체의 탈색속도의 차이로 인하여 서로 다른 색상을 보이는 것이다. 이러한 탈색 속도는 검체의 두께, 물리적 성상도 영향을 미치므로 검체에 따라 적절한 방법을 사용해야한다. 검체의 그람염색의 결과는 일차적으로 임상미생물검사실에서 검체로부터 배양된 균 집락의 판독에 보조적 역할을 하고 있다. 그람염색은 임상적으로 객담검체의 적절성을 판독하여 배양된 결과의 임상적 적용여부를 결정하는 중요한 검사이다. 최근에는 부인과 영역에서 Nugent scoring을 통한 세균성 질염을 진단하는데 사용되고 있다. 결 론 그람염색은 단순하기 때문에 오류가 많을 수 있는 검사이며, 따라서 많은 경험을 필요로 한다. 또한 그람염색을 통해 일상적으로 놓치기 쉬운 특이한 감염상황을 사전에 감지할 수도 있기 때문에 원칙적인 검사단계 등을 면밀히 지켜 행하는 것이 중요하다.

2AFB Fluorochrome 염색시 멸균 증류수와 Phosphate Buffer를 이용한 Slide 판독 비교 평가

저자 : 심재성 , 이준표 , 이유리 , 함정일 , 조명순 , 윤옥진 , 고창하 , 성문우

발행기관 : 대한임상병리사협회 간행물 : 임상미생물검사학회 초록집 2009권 1호 발행 연도 : 2009 페이지 : pp. 51-51 (1 pages)

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배 경 : AFB 염색을 하기위해서는 검체 중 잡균 제거와 점액성 검체의 소화를 위해 전처리를 실시하고, sodium hydroxide법이 가장 흔히 사용되고 있다. 본원에서 사용하는 전처리 방법은 4% NaOH를 이용하고 Clinical Microbiology Procedures Handbook에서 제시한 멸균 증류수를 원심분리 전에 넣고 있다. 원심분리 전 멸균 증류수와 0.067 M phosphate buffer(pH 6.8)를 사용한 것과 4% NaOH만 넣어 slide를 제작한 것 3 가지 방법을 AFB Fluorochrome 염색하여 비교평가 하였다. 방 법 : AFB 염색 음성이 확인된 환자의 객담검체를 3 개 선별하여 50 mL tube에 준비하고, NTM 균주를 0.5 McFaland 탁도로 균액을 준비하여 각 tube에 5 mL식 첨가 혼합하였다. 검체와 동량의 4% NaOH를 이용하여 20 분 동안 전처리 후 원심 분리 전 2 개의 tube에는 각각 멸균 증류수와 0.067 M phosphate buffer(pH 6.8)를 50 mL tube에 가득히 채우고 한 tube는 어떤 첨가도 하지 않은 상태에서 원심 분리하여 slide를 제작 하였다. 이런 방법으로 1 일 10 slide씩 5 일 동안 150 개의 slide와 3 일 동안 15 검체 95 개의 slide를 제작하여 CDC의 형광염색 보고 방법에 따라 판독하였다. 결 과 : 1일 10 slide씩 5 일 동안 150 개의 slide 제작하여 판독한 결과에서는 4% NaOH만 넣은 slide는 음성과 +/-: 94 건, 1+이상은 56 건 이였다. 멸균 증류수를 첨가한 slide는 음성과 +/-: 3 건, 1+이상은 147 건 이였고 phosphate buffer를 첨가한 slide는 음성과 +/-: 2 건, 1+이상은 148 건 이였다. 멸균 증류수를 첨가한 slide만이 P-value:<0.05의 유의한 차이를 보였다. 3 일 동안 15 검체 95 개의 slide를 제작하여 판독한 결과에서는 모두 1+이상의 결과를 보였으며 P-value:<0.05로 유의한 차이를 보였다 고 찰 : 실험 결과 멸균 증류수와 phosphate buffer를 원심 분리 전 첨가하는 것은 침전물의 지속적인 NaOH 반응을 감소시키고 부착력을 증가시켜 slide 판독시 양성등급을 높이는 것으로 사료된다.

3AFB 배양 전처리 시 Acid Plus 사용에 따른 오염률 저하 효과

저자 : 박혜경 , 원대섭

발행기관 : 대한임상병리사협회 간행물 : 임상미생물검사학회 초록집 2009권 1호 발행 연도 : 2009 페이지 : pp. 51-51 (1 pages)

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배 경 : 최근 분자생물학의 발달로 빠른 시간안에 결핵균의 검출률은 높아졌다. 그러나 약제내성 검사를 시행하기위해 꼭 필요한 과정인 배양검사는 검사소요일이 긴 단점을 가지고 있어 성공률을 높이기 위한 여러 가지 방법이 연구되고 있다. 본원에서는 잡균 오염으로 인한 배지융화현상을 최소화하고 배양검사의 성공률을 높이기 위하여 Acid plus 산성시약을 사용하여 사용 전과 사용 후의 오염률, 양성률을 비교하여 시약의 유의성을 알아보고자 하였다. 방 법 : 객담 내에는 결핵균보다 발육속도가 빠른 잡균이 많이 있으므로 이들을 제거하고 점액질인 객담을 액화시켜 항산균이 배지에 접촉할 수 있도록 NALC-NaOH를 사용하여 다음과 같은 방법으로 전처리를 하였다. 1) 4% NaOH 400 mL에 N-acetyl-L-cystine 2 mg을 첨가하여 전처리용 시약을 만든다. 2) 검체 1 mL에 1)의 방법으로 제조된 시약을 첨가하여 15분 방치 후 충분히 교반한다. 3) 4℃, 3600 rpm, 30 분 원심분리한 뒤 상층액을 제거한다. 4) 침사에 동량의 Acid plus를 넣고 10 분간 방치 후 교반하여 침사를 접종한다. 결 과 : 2 년간 결핵균 배양 검사에서의 양성은 총 의뢰 건 수 35,211 건 중 3,785 건이 배양 검사 양성으로 10.75%의 양성률을 나타냈으며, 년도별 양성률은 2006년에 9.73%, 2007년에 11.65%로 2006년에 비교하여 그 변화 추이는 미비하나 증가되었다. Acid plus 사용 전의 오염률은 9.53%였지만 사용 후 3.54%로 현저히 줄어든 결과를 보였다. 양성률은 사용 전 11.58%, 사용 후 12.33%로 전처리 과정 중 Acid plus 추가 사용으로 인한 결핵균의 활성저하 등의 양성률 저하는 보이지 않았다. 고 찰 : 결핵균의 배양을 위해서 검체에 존재하는 잡균이 제거 되지 않으면 배지가 액화되는 등 올바른 배양을 할 수 없으므로 전 처리 과정 중 잡균제거는 아주 중요하다. 하지만 오염률 감소만을 중요시하여, 양성률의 변화를 간과하여서는 안 될 것이다. Acid plus의 사용은 오염률을 현저히 감소시키면서 양성률 저하를 보이지 않아 오염률 감소를 위한 유용한 과정이라고 볼 수 있다.

4MGIT 배지 양성 검체에서 MTB 검출을 위한 MPT64 Rapid Test의 유용성 평가

저자 : 이의식 , 이민정 , 박정준 , 박준홍 , 박연준

발행기관 : 대한임상병리사협회 간행물 : 임상미생물검사학회 초록집 2009권 1호 발행 연도 : 2009 페이지 : pp. 52-52 (1 pages)

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배 경 : 배양된 항산균의 동정은 일차로 항산성 염색과 결핵균 PCR을 실시하여 결핵균 여부를 확인하는 것이 일반적이다. 본 연구에서는 결핵균 감별을 위하여 Mycobacterium tuberculosis complex(Mycobacterium tuberculosis, M. africanum, M. bovis)가 분비하는 특이 항원 MPT64를 immunochromatographic assay를 이용하여 결핵균 동정 과정을 간편화 할 수 있는 MPT64 rapid test의 유용성을 TB/NTM real time PCR과 비교평가하였다. 방 법 : 특이성 검출을 위하여 M. avium ATCC35719, M. kansasii ATCC12478, M. fortuitum ATCC6841, M. intracellulae ATCC13950, M. tuberculosis ATCC27293, M. tuberculosis H37Rv 균주를 이용하여 반응 여부를 검사하였다. MGIT 배양 검사에서 양성인 83 검체를 대상으로 TB/NTM real time PCR(SCAN, LG 생명과학)을 시행하여 MTB로 판정된 43 검체와 NTM으로 판정된 40 검체를 대상으로 MPT64 rapid test를 시행하였다. 민감도 검증을 위하여 2008년 4월부터 8월까지 MGIT 배양 검사상 양성인 116 검체를 대상으로 MPT64 rapid test를 시행하고 약약성과 음성인 검체에 대해서는 TB/NTM real time PCR를 시행하여 MTB와 NTM을 감별하였다. 결 과 : M. tuberculosis 표준균주 2 균주 모두 양성이었으며, 비결핵 항산균 표준균주 4 균주 모두 음성이었다. TB/NTM real time PCR 결과 중 MTB 43 검체 모두 MPT64 검사에서 양성(약양성 2개 포함)을 보였으며 NTM40 검체는 모두 음성을 보여 민감도와 특이도가 모두 100%였다. MGIT배양 검사에서 양성인 116개의 결과에서는 양성 42개, 약양성 30개, 음성 44개였다. MPT64 rapid test상 약양성인 30개의 검체를 대상으로 TB/NTM real time PCR결과 모두 MTB였다. MPT64 rapid test가 음성인 44개의 검체를 대상으로 TB/NTM real time PCR을 실시한 결과 MTB 17개, NTM 27개로 M. tuberculosis에 대한 MPT64 rapid의 민감도는 80.9%였다. 결 론 : MPT64 rapid test는 MGIT 배양 검사에서 양성인 검체에서 M. tuberculosis검출에 대해 민감도가 80.9%를 보였다. 이는 MGIT 배지내 결핵균의 농도가 낮았기 때문인 것으로 판단된다. 따라서 낮은 민감도를 보완하기 위하여 MGIT배양 양성인 검체 중 MPT64 rapid test에서 음성인 경우 반드시 TB/NTM real time PCR검사를 추가로 시행하여 MTB와 NTM을 감별해야 한다.

5Detection of Mixed Infection of Mycobacterium tuberculosis and other Mycobacterium species by using Line Probe Assay

저자 : Hye-soon Seong , Tae-wan Kim , Kyung-ok Lee , Kang-hee Song

발행기관 : 대한임상병리사협회 간행물 : 임상미생물검사학회 초록집 2009권 1호 발행 연도 : 2009 페이지 : pp. 52-52 (1 pages)

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Background : Mycobacteria cause a variety of illness that differs in severity and public health implications. The differentiation of Mycobacterium tuberculosis from nontruberculous mycobacteria(NTM) is of primary importance for infection control and choice of antimicrobial therapy. Frequency of NTM has been reported to 15~25% among culture positive patients for AFB. Traditionally sequencing method is considered to gold standard for identification of bacteria species. However mixed infection could not be easily solved by sequencing. In this study, we performed the identification of NTM species in mixed infection by line probe assay and evaluated for the usefulness in clinical microbiology laboratories. Methods : DNA was extracted from cultured colony sample by using commercial kit(Zymo Research Co, USA). For detection of NTM in mixed culture, a commercially available DNA strip assay(Genotype® Mycobacterium CM assay, Hain lifescience, Nerhen, Germany) was used. Primers were selected from the 23S rRNA gene of Mycobacterium species. Hybridization and data analysis were performed according to the manufacture`s instruction. Results : The data by using line probe assay were compared to PCR-sequencing. In one case of mixed culture, M. tuberculosis and M. avium were detected using line probe assay, however M. tuberculosis was only determined by sequencing. For the other mixed sample, M. intracellulae and M. avium was detected by line probe assay but M. intracellulae was only determined by sequencing. In one case of contaminated culture, M. pergrium was detected by line probe assay, however it was not clearly identified by sequencing because of mixed sequencing peaks. Conclusion : When AFB culture is contaminated of mixed culture, the clear identification of mycobacteria by sequencing would become complicated. Small copies of bacteria in specimen could be masked with major infected microorganisms. The line probe assay presented here is a simple and accurate method and it could be useful for identifying of NTM in mixed culture or contaminated culture of AFB.

6GenoType MTBDRPlus Kit를 이용한 항결핵약제 신속내성검사(INH, RIF)의 유용성 평가 및 유전자 변이 조사

저자 : 조정희 , 김은주 , 강성호

발행기관 : 대한임상병리사협회 간행물 : 임상미생물검사학회 초록집 2009권 1호 발행 연도 : 2009 페이지 : pp. 53-53 (1 pages)

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배 경 : 최근 증가하고 있는 다제내성결핵균(multi-drug resistance TB, MDR-TB)은 일차 결핵 치료 약제에 반응하지 않아 임상적 치료 시 문제가 되고 있다. GenoType MTBDRPlus kit(HAIN Lifescience GmbH, Germany)는 임상 검체와 배양 균주을 대상으로 하여 이와 같은 결핵균의 내성 관련 유전자의 돌연변이 부위를 직접 검출할 수 있는 방법으로 이 kit를 이용한 항결핵약제신속내성검사(INH, RIF)의 유용성을 평가하고 검사 결과의 통계 분석을 통하여 한국인 환자에 있어서의 내성 결핵균의 빈도와 유전자 변이가 어느 정도로 나타나고 있는지 조사해 보고자 하였다. 방 법 : 2009년 2월 1일에서 2009년 4월 30일까지 3 개월간 본원에 의뢰된 항결핵약제신속내성검사(INH, RIF) 168 건을 대상으로 하였다. 검사과정은 제조사의 지침에 따랐다. 결 과 : 내성 돌연변이가 검출된 건이 35 건으로 전체 의뢰 건수 대비 20.8%를 차지하고 있는 것으로 나타났다. 이 중 단독 내성이 24 건으로, INH 단독 내성을 보인 경우가 18 건, RIF에 단독 내성을 보인 경우는 6건이었다. INH 내성의 경우는 katG(S315T) 9건, inhA(-15C>T) 9건, RIF 내성의 경우는 rpoB(S531L) 4건, rpoB(526-529) 2건을 보였다. RIF와 INH에 동시 내성을 보인 다제 약제 결핵균은 11건으로, katG(S315T)와 rpoB(S531L) 5건, katG(S315T)와 rpoB(H526Y) 2건, katG(S315T)와 rpoB(518-525) 1건, inhA(-15C>T)와 rpoB(S531L) 2건, inhA(-15C>T)와 rpoB(513-519) 1건으로 조사되었다. 내성 돌연변이가 검출되지 않은 건은 105건으로 전체 의뢰 건수 대비 62.5%를 차지 했고, M. tuberculosis 음성으로 보고된 건은 28건으로 16.7%로 조사되었다. 고 찰 : GenoType MTBDRPlus kit를 이용한 항결핵약제신속내성검사(INH, RIF)는 기존 배양법에 비해 1~2 개월 빠른 검사 보고가 가능하다. 또한 PCR-Direct Sequencing 법보다 검사 과정이 간단하며 24 시간 이내에 결과 보고가 가능한 것으로 나타나 항결핵 약제 내성 결핵균의 신속한 검출에 유용할 것으로 사료된다.

7호흡기 검체에서의 Abbott m2000sp/m2000rt System을 이용한 AdvanSure TB/NTM Real-time PCR Kit의 임상적 유용성 평가

저자 : 김종수 , 이인우 , 유은성 , 남정현 , 김진주

발행기관 : 대한임상병리사협회 간행물 : 임상미생물검사학회 초록집 2009권 1호 발행 연도 : 2009 페이지 : pp. 53-53 (1 pages)

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배 경 : 결핵의 진단을 위한 PCR법은 신속하고 정확한 검사법으로 가장 많이 쓰이고 있는 검사방법이다. 본 연구에서는 결핵균과 비결핵 항상균을 감별할 수 있게 real time PCR 방법을 기반으로 개발된 AdvanSure TB/NTM real-time PCR kit(LG Life Science Diagnostic Division, Korea)를 real-time PCR 자동화장비(m2000sp/m2000rt, Abbott)에 적용하여 민감도와 특이도 평가를 하였고, 결핵의 진단을 위한 임상적 유용성을 평가하였다. 방 법 : 민감도 평가는 결핵균이 배양된 호흡기 검체 35 검체(AFB stain 양성 35, 음성 10 검체) 및 비결핵항상균이 배양된 3개의 검체를 대상으로 실시 하였다. 특이도 평가는 임상적으로 항상균 감염증이 배제된 호흡기 검체 34 검체(특이도 1군)와 항상균 감염증이 완전히 배제된 일반 미생물 표준균주 24 검체(특이도 2군)를 대상으로 실시하였다. 분석민감도 평가를 위해서 정량 검사 방법인 M. tuberculoisis PCR Kit(Abbott)와 Quantification of M. tuberculoisis(TB) genomes Kit(PrimerDesign)를 이용하여 실시하였다. 결 과 : 결핵균이 배양된 35 검체 중 AFB stain 양성 검체 25/25(100%), AFB stain 음성 검체 7/10(63.6), 총 32 검체가 real time PCR 양성 결과를 보였다(민감도 91.4%). NTM 배양 양성 검체 중 2 건(66.7%)이 NTM 양성 결과를 보였다. 특이도 1군 및 특이도 2군 검체 모두 TB 또는 NTM에 PCR 음성 이었다. 분석민감도는 M. tuberculoisis PCR Kit에서 97.2%(≥1 copies /μL)이었고, Quantification of M. luberculoisis(TB) genomes Kit(PrimerDesign)에서 100%(≥9 copies/μL)를 보였다. 고 찰 : AdvanSure TB/NTM real-time PCR kit를 real-time PCR 자동화장비에 적용하여 DNA 및 PCR 증폭 반응을 실시한 결과 AdvanSure TB/NTM real-time PCR kit와 DNA sample preparation kit의 방법간 민감도와 특이도는 차이가 없이 우수한 결과를 보였다. 호흡기 검체 체취의 특성상 대상자의 개인차에 의하여 검체에 포함된 결핵균의 양이 일정치 않다는 점을 고려 할 때 소량의 결핵균이 포함된 검체에서도 우수한 분석민감도를 보이고 있어 결핵의 초기 진단에 유용하게 쓰일 수 있을 것으로 판단된다.

8결핵균군 분비 특이항원 MPT64를 이용한 면역크로마토 그래피법의 Parallel Test와 PCR법에 대한 비교평가

저자 : 서재필 , 조영동 , 진교영 , 최남호 , 안충숙 , 김현경 , 이숙자 , 박혜영 , 문균오 , 김성훈

발행기관 : 대한임상병리사협회 간행물 : 임상미생물검사학회 초록집 2009권 1호 발행 연도 : 2009 페이지 : pp. 54-54 (1 pages)

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배 경 : 최근 들어 결핵균의 동정은 액체배지를 사용한 배양과 배양된 균체를 결핵균군 분비 특이항원 MPT64를 이용한 면역 크로마토그래피법으로 동정함으로써 기존의 고체배지 배양과 육안 판독이나 PCR법에 의한 동정보다 간단하고 신속하게 할 수 있게 되었다. 본 연구에서는 결핵균 동정에 있어서 SD BIOLINE TB Ag MPT64 RAPID(이하TB Ag MPT64, SD, Korea)와 기존의 PCR 법을 비교평가하고, TB Ag MPT64의 Parallel test 결과를 소개하고자 한다. 방 법 : BACTEC MGIT 960 System(BD, USA) 양성인 검체 중 Ziehl-Neelsen 염색 양성인 195 건에 대하여 TB Ag MPT64 키트와 M&D TB-Tag(M&D, Korea)의 성적을 비교평가하였다. 두 결과 상이한 경우 COBAS TaqMan 48 MTB(Roche Diagnostics, Germany)와 M&D Myco-ID(M&D, Korea)로 확인검사하였다. 30 검체를 선별하여 TB Ag MPT64 키트의 두가지 LOT.(104002와 104004)에 대한 parallel test를 실시하였다. 결 과 : 총 195 건 중 PCR 양성(TB-Tag, Myco-ID 포함)은 113 건이었고 TB Ag MPT64 양성은 90 건으로 PCR에 대한 민감도는 79.6%이었다. PCR 음성 82 검체는 모두 TB Ag MPT64 음성으로 PCR에 대한 특이도는 100%였다. TB Ag MPT64 위음성은 23 검체 중 13 검체는 COBAS TaqMan 48 MTB에서 양성이 었으며, 음성인 10 검체는 고체배지 계대배양에 결핵균 집락을 확인하였다. TB Ag MPT64 키트의 새로운 LOT.104004는 LOT.104002 위음성 23 검체 중 9 검체는 양성을 보여 전체 PCR에 대한 민감도는 87.6%였다. 고 찰 : TB Ag MPT64 음성인 경우 위음성에 따른 추가 확인 검사가 필요하나, TB Ag MPT64 양성인 경우 항산균 배양 양성 인지(認知) 당일 결핵균 양성보고가 가능해 신속검사에 유용할 것으로 판단된다. TB Ag MPT64 임상평가에서의 검출한 계는 105 CFU/mL로 BACTEC MGIT 960 항산균 배양 양성 인지 한계와 유사하여 별도의 처리 없이 직접검사가 가능하지만, 결핵균과 비결핵항산균 또는 오염균이 동시에 배양 된 경우 결핵균이 검출한계에 못 미쳐 TB Ag MPT64에서 위음성으로 판정될 가능성이 있을 것으로 사료된다.

9COBAS< sup >®< /sup > Amplicor MTB, COBAS< sup>®< /sup > TaqMan MTB 및 Seeplex< sup >®< /sup > MTB ACE 키트를 이용한 결핵균 검출 성적평가

저자 : 김영훈 , 강봉주 , 김선희 , 서원길 , 정선아

발행기관 : 대한임상병리사협회 간행물 : 임상미생물검사학회 초록집 2009권 1호 발행 연도 : 2009 페이지 : pp. 54-54 (1 pages)

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배 경 : 결핵은 여전히 국내에서 수위를 차지하는 주요한 감염 질환이며 결핵의 신속진단을 위하여 핵산증폭검사가 널리 사용 되고 있다. 저자들은 상용화된 결핵균의 PCR검사 키트인 COBAS® Amplicor MTB(Roche, USA), COBAS® TaqMan MTB(Roche, USA) 및 Seeplex® MTB ACE(Seegene, Korea)의 성적을 비교 평가하였다. 방 법 : 대상은 2009년 1월부터 3월까지 전남대학교병원에서 결핵균배양, 항산균 도말검사 및 PCR검사가 동시 의뢰된 243예의 검체를 배양 및 항산균 도말의 결과에 따라 다음과 같이 5 군으로 구분하였다: A군(n=8), 결핵균배양 양성, 항산균 도말 양성; B군(n=34), 결핵균배양 양성, 항산균 도말 음성; C군(n=2), 비결핵항산균배양 양성, 항산균 도말 양성; D군(n=16), 비결핵항산균배양 양성, 항산균 도말음성; E군(n=183), 배양 음성, 항산균도말 음성. 각 군을 대상으로 COBAS® Amplicor MTB, COBAS® TaqMan MTB 및 Seeplex® MTB ACE 키트를 이용하여 결핵균을 증폭하였다. 결 과 : Amplicor, TaqMan 및 Seeplex 키트의 결핵균 검출 양성률은 A군에서 모두 100%(8/8), B군에서 각각 67.6%(23/34), 50%(17/34) 및 70.5%(24/34), C군과 D군에서는 모두 음성이었다. 음성대조군인 E군에서는 각각 1.0%(2/186), 2.6%(5/186) 및 2.1%(4/186)에서 양성 결과를 보였다. E군에서 3 키트 중 어느 하나의 검사에 위양성을 보인 검체는 총 6 예이었고, 이 중 2 예가 3 키트에 모두 양성, 1 예가 TaqMan과 Seeplex에 양성, 1 예는 Seeplex에만 2 예는 TaqMan에 양성이었다. Amplicor, TaqMan 및 Seeplex 검사에 대한 ROC곡선 분석상 AUC(area under curve)는 각각 0.8641(95% CI: 0.7964, 0.9317), 0.7852(95% CI: 0.7092, 0.8611), 0.8710(95% CI: 0.8051, 0.9369)이었다. Amplicor와 Seeplex 간 AUC의 차이는 통계적으로 유의하지 않았지만, Amplicor와 TaqMan간(P=0.0456), Seeplex와 TaqMan간(P=0.0105) AUC는 유의한 차이를 보였다 고 찰 : Amplicor와 Seeplex키트 간 임상 검체를 대상으로 한 결핵균 검출 성적은 서로 비견할 만한 것으로 사료된다. TaqMan과 Amplicor 혹은 Seeplex 키트간의 비교 평가는 더 많은 검체를 대상으로 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다.

10Fecal Occult Blood 검출용 Gum Guaiac Kit를 이용한 범죄현장 혈흔검출 및 LMG(Leuco Malachite Green) 대체시약으로의 고안

저자 : 임채원 , 이종훈 , 김형락 , 김양호 , 김진각

발행기관 : 대한임상병리사협회 간행물 : 임상미생물검사학회 초록집 2009권 1호 발행 연도 : 2009 페이지 : pp. 55-55 (1 pages)

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배 경 : 살인 및 강력사건 현장에서 범인의 혈흔유무 감별은 초기 수사방향 설정 및 사건 해결에 매우 중요한 부분을 차지 하고 있다. 그러나 현재 범죄현장 혈흔유무 감별시험에 사용하는 화학시약 LMG(leuco malachite green)의 경우 비특이적 반응과 발암성, 폭발 가능성 등 여러 가지 인체에 유해한 문제점을 내포하고 있다. 이에 본 연구에서는 임상환자의 분변 occult blood 검출 목적의 Gum guaiac kit를 이용, 반응 우수성 등을 증명하여 LMG 혈흔검출 화학시약의 문제점을 해결하고 대체 시약으로 고안하고자 하였다 방 법 : Gum guaiac kit를 이용하여 LMG 혈흔 검출 화학 시약과의 장ㆍ단점 비교와 민감도(희석배수, 유류대상 등), 특이성(화학물질의 영향, 과산화활성물질의 영향 등), 인체 안전성, 부패 미생물 및 DNA 영향, 가격적인 차이 부분에 있어 실제적인 분석을 통하여 검증하였다. 결 과 : Gum guaiac kit와 LMG시약의 민감도, 특이성, 인체 유해성(발암성과 폭발 위험성) 및 결과 정확도, 부패 미생물의 영향 등 여러 가지 조건 하에서 큰 차이가 없거나 오히려 일부 조건에서는 더 우수한 결과를 보이는 것을 확인할 수 있었다. 또한 Gum guaiac kit의 경우 kit화 되어 혈흔 의심 물질에 직접 도포하지 않으므로 DNA물질 훼손에 영향을 미치지 않으며, 과산화 활성물질에도 영향을 받지 않는 것으로 확인되어 LMG 시약의 단점을 해결할 수 있었다. 고 찰 : 검사방법이 어렵고 생소한 새로운 기법을 개발한다는 것은 현장 과학수사요원들에게 있어 사건 현장에서의 활용성이 크게 떨어질 것으로 예상되곤 한다. 그러나 인체 유해성이 적고 키트화로 휴대가 편리하며 검사방법 및 결과 판독방법에 있어서 LMG 시약과 크게 차이가 없으며, 오히려 사용방법에 있어 더욱 더 간단하고 편리한 Gum guaiac kit시약으로 대체하여 DNA의 안전성을 확보할 수 있었다. 또한 수년간 문제시 되었던 사건현장에서의 과학수사요원들로 하여금 암 유발 물질이나, 인체에 유해한 화학물질 등의 위험한 환경에 노출되는 것을 미연에 방지하게 됨으로서 범죄현장에서의 건강위협에 대한 문제를 해결함과 동시에 국가예산을 절감하는데 크게 기여할 수 있을 것으로 사료되어진다.

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